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如何檢測(cè)細(xì)胞凋零?

 更新時(shí)間:2023-09-14 點(diǎn)擊量:749

細(xì)胞凋亡是程序性細(xì)胞死亡的高度調(diào)控形式,在多細(xì)胞生物發(fā)育過程中、整個(gè)生命周期以及對(duì)細(xì)胞應(yīng)激作出反應(yīng)時(shí)均可發(fā)生細(xì)胞凋亡。核固縮、細(xì)胞皺縮、質(zhì)膜出泡和 DNA 斷裂是細(xì)胞凋亡的典型特征。那么你知道如何檢測(cè)細(xì)胞凋零嗎?讓我們一起來(lái)看看吧!

一、對(duì)細(xì)胞懸浮液進(jìn)行 Annexin V 染色后,通過流式細(xì)胞儀可以有效地識(shí)別細(xì)胞凋亡早期脂質(zhì)雙層的變化。但是,這種檢測(cè)不太適合完整的組織標(biāo)本,否則結(jié)果難以量化和解釋。

二、其他細(xì)胞凋亡標(biāo)記,如 Cleaved Caspase-3 和核酶多聚二磷酸腺苷核糖 (ADP-ribose) 聚合酶 (PARP),更適合用傳統(tǒng)的免疫組織化學(xué)方法在組織切片中檢測(cè)。

三、使用 DNA 染料染色(例如 DAPI 和 Hoeschst 33342)來(lái)觀察染色質(zhì)凝聚。

四、使用末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo) dUTP 缺口末端標(biāo)記法 (TUNEL) 檢測(cè)以及其他亞細(xì)胞定位標(biāo)記(包括 細(xì)胞色素 C 從線粒體到細(xì)胞質(zhì)的轉(zhuǎn)位)確定 DNA 鏈斷裂和碎片裂解。

五、線粒體膜電位是細(xì)胞健康狀態(tài)的關(guān)鍵指標(biāo),其損耗與非活性、功能失調(diào)的線粒體,因此,它是細(xì)胞凋亡的早期指標(biāo),可以在與細(xì)胞可滲透陽(yáng)離子染料 TMRE(四甲基羅丹明乙酯)孵育后進(jìn)行檢測(cè)。TMRE 通常在健康完整線粒體中累積,因此,當(dāng)線粒體膜電位被破壞時(shí),熒光強(qiáng)度降低。

六、生長(zhǎng)因子和細(xì)胞因子通過PI3K/Akt 途徑誘導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)會(huì)導(dǎo)致促凋亡的 Bcl-2 家族成員 Bad、Bax、caspase-9、GSK-3 和 FoxO1 的磷酸化和抑制,以及抗細(xì)胞凋亡蛋白如 Bcl-2 的上調(diào)。

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